小朗課堂 前兩天，小朗在與某實驗室研究員交流時了解到這么一個情況，他們在qPCR實驗時使用透明管，得到的實驗結果熒光信號值比較低，曲線被壓得很低，坐標軸也不太能自適應曲線，顯示如下圖。 而正常情況如下圖，縱坐標的范圍是可以隨著曲線最大熒光信號值而變化的，并可獲得一條漂亮的S曲線。 明白了這個情況后，小朗為其推薦了白管，更換成白管后，問題就迎刃而解了。 那么，問題來了， 為何做qPCR實驗時一定要用白管呢？ 熒光信號值與哪些因素有關呢？ 我們一起來學習一下吧～ PCR管/板常見的有白色和透明兩種。在傳統(tǒng)PCR實驗中，兩者在使用效果上沒有太大差異，相比較透明管更為方便，因為實驗者更容易看清楚試劑加上與否。但在熒光定量PCR實驗中，白管的優(yōu)勢就凸顯出來了。 qPCR實驗的核心數(shù)據(jù)是Ct值，而熒光信號是Ct值計算的數(shù)據(jù)來源，所以管內的熒光能否完好地傳遞至頂部的檢測器是至關重要的。 如下圖是三種不同透明度的管子，因為透明管四周均是透明的，對于底部試劑激發(fā)出來的熒光會散向四面八方，管內的熒光信號只有少量能到達管頂部，最終只有少量信號進入檢測器，且管間熒光信號不一致。 圖1 白管和透明管內部熒光信號路線圖 然而，如圖1所示，與其他管材相比，白管管壁不透明，幾乎沒有信號丟失，且隔絕了樣品臺污染的熒光信號干擾，減少了相同樣本孔間差異。 圖2 白管和透明管檢測信號對比圖 從圖2中可以看出，同樣試劑量的情況下，到達檢測器的信號強度，使用白管明顯高于透明管。因此相比于透明管，使用白管可明顯提高檢測器檢測到的信號強度，提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度。 正因為白管有著高靈敏度的特性，使用白管可以采用小體積反應，從而可減少實驗試劑量，大大節(jié)省成本～ 圖3 白管擴增結果展示圖 國際一線品牌也同樣證實白管更適合實時熒光定量實驗的結論。 賽默飛 如上圖，qPCR使用透明和白色耗材的結果比較： （A）與透明孔相比，白色孔Ct值更低（靈敏度更高）。 （B）白色孔在技術重復中也表現(xiàn)出更高的一致性。 在設置實時PCR或qPCR的反應時，與透明耗材相比，我們更推薦使用白色耗材，以實現(xiàn)靈敏和準確的熒光檢測。 ——賽默飛生命科學 Jena Sarstedt Eppendorf 那么熒光定量PCR儀需要采用 什么技術才能滿足使用白管呢? 我們來看一下 國際主流品牌的定量PCR儀產品， 一探究竟吧～ 首先我們來看一下賽默飛的高端系列Q5和Q7，他們用的是CCD頂部檢測的技術方案，再來看一下羅氏的旗艦產品LG480，我們可以看到，他們用的也是CCD頂部檢測技術。 朗基是國內第一家全部采用頂部CCD檢測技術的定量PCR儀廠家。 朗基奧金系列熒光定量PCR系統(tǒng) 頂部CCD檢測技術光學部件固定，穩(wěn)定性好，故障率低，對熒光信號的接收和處理能力強，是定量PCR儀檢測技術的大勢所趨。 頂部CCD檢測技術 此外，同樣是白管，我們實驗證明白管的質量高低也會影響熒光信號值的大小。如下圖： 結果表明，相較于其他品牌白色管和透明管的擴增曲線，朗基標配的白色管的熒光信號值更強，曲線重合度更好。 綜上所述， 在進行qPCR實驗時， 使用白管和頂部檢測技術的qPCR儀， 可獲得更佳實驗結果。 朗基奧金系列熒光定量PCR儀 采用頂部CCD檢測技術， 配套的管材都是白管， 也可單獨采購白管， 歡迎選購朗基產品， 聯(lián)系我們哦～
